RNA依赖的RNA聚合酶（RdRP）是正链RNA病毒基因组复制的关键酶类，一直以来都是抗病毒药物研究的热门靶点。生物信息学分析表明，1型鸭甲肝病毒（DHAV-1）作为单股正链RNA病毒的一员，其RdRP由病毒的3D基因编码，但未经实验证实。
本研究首先将DHAV-1的3D基因克隆到pET-32a(+)载体以对3D蛋白进行原核表达，并对表达条件进行了优化。此外，采用了三种方法对3D蛋白的RdRP功能进行了鉴定：（1）钼酸铵分光光度法检测聚合酶反应中过程中生成的焦磷酸; （2）定量PCR检测聚合酶反应中RNA量的变化;（3）电泳迁移率实验（EMSA）检查3D蛋白质与3′ UTR之间的相互作用。结果表明，3D蛋白在细菌培养物上清液中以可溶形式成功表达，并可通过亲和层析纯化。在酶活性测定中，焦磷酸和RNA的量以相近的动力学特征呈现上升趋势，并且观察到3D蛋白与3′ UTR的结合。这些结果表明原核表达的可溶性DHAV-1 3D蛋白可以结合病毒基因组3′ UTR并表现出RdRP活性。
本研究是对DHAV 3D蛋白的RdRP活性及其与基因组3′ UTR相互作用的首次研究，为研究DHAV基因组的复制机制奠定了基础。相关研究结果以“The 3D protein of duck hepatitis A virus type 1 binds to a viral genomic 3′ UTR and shows RNA-dependent RNA polymerase activity”为题目已经在Virus Genes在线发表。
原文链接:https://rd.springer.com/article/10.1007%2Fs11262-017-1476-5
