鸭乙肝病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)属于嗜肝病毒科禽嗜肝病毒属的病毒,该病毒感染鸭是研究嗜肝病毒良好的动物模型。本研究初步探究了编码DHBV包膜和衣壳蛋白融合基因疫苗免疫效果。
鸭乙肝病毒包膜大蛋白和小蛋白分别由病毒L基因和S基因表达,衣壳蛋白由病毒C基因表达。融合基因LC或SC是将L基因或S基因分别与C基因克隆到同一真核表达载体pVAX1,将重组真核质粒分别转入减毒沙门氏菌SL7207递呈。在第1次免疫后14d检测出肝脏中融合基因疫苗转录,从21d到49d均逐渐升高,且在各个检测时间点,SL7207-pVAX1-SC和SL7207-pVAX1-LC组中各基因的转录水平较SL7207-pVAX1-L、SL7207-pVAX1-S低(除了SL7207-pVAX1-C组)但比SL7207-pVAX1-L+ SL7207-pVAX1-C和SL7207-pVAX1-S+ SL7207-pVAX1-C组高;L基因的转录量显著高于S和C两个基因,在第49d达到近S、C基因的三倍。间接ELISA检测外周血抗体含量表明:SL7207-pVAX1-SC和SL7207-pVAX1-LC组显著高于其余各组,其中SL7207-pVAX1-LC在各个时间点都最高。检测脾脏中CD4 和CD8 分子转录量发现:各组(PBS组除外)的CD4转录量较CD8分子高,约为CD8分子转录量的两倍。含有L和C 的基因组转录量均高于S基因各组,且SL7207-pVAX1-LC组CD4、CD8分子转录量均最高。
免疫后攻毒后检测肝细胞中病毒cccDNA的含量发现:SL7207-pVAX1-SC和SL7207-pVAX1-LC组较SL7207-pVAX组降低最快。SL7207-pVAX1-SC组从70.50% (57d)升高到 77.19% (71d),SL7207-pVAX1-LC组从81.17% (57d)升高到 85.58% (71d);表明:SL7207-pVAX1-SC和SL7207-pVAX1-LC组,特别是SL7207-pVAX1-LC组的免疫保护能力稍强。
本试验融合基因递呈组能减少主要组织相容性复合体(MHC)作用的局限性。采用减毒沙门氏菌作为载体将抗原基因准备递呈到靶器官,并且同时也是一种有效的疫苗佐剂。在以后的研究中,三基因或多基因融合疫苗,以及DNA疫苗的治疗作用值得被探讨。相关结果以“Immunogenicity and protective effcacy of DHBV DNA vaccines expressing envelope and capsid fusion proteins in ducks delivered by attenuated Salmonella typhimurium”为题发表于Journal of Integrative Agriculture 2018, 17(4): 928–939; doi: 10.1016/S2095-3119(17)61829-X。